多肽的二维色谱分离研究.doc

  
约32页DOC格式手机打开展开

多肽的二维色谱分离研究,separation of peptides by two-dimensional chromatographic 1.2万字32页原创作品,已通过查重系统 摘 要目的: 以二维液相色谱为核心手段,结合其他分离技术,建立蛋白水解物为代表的多组分体系的分离方法,实现对多元组分的分离。从而进一步分析多...
编号:99-1434595大小:3.48M
分类: 论文>生物/化学论文

内容介绍

此文档由会员 马甲线女神 发布

多肽的二维色谱分离研究
Separation of peptides by two-dimensional chromatographic

1.2万字 32页 原创作品,已通过查重系统


摘 要
目的: 以二维液相色谱为核心手段,结合其他分离技术,建立蛋白水解物为代表的多组分体系的分离方法,实现对多元组分的分离。从而进一步分析多元组分中各组分的活性,为工业化生产活性多肽时建立产品品质控制体系积累一定的基础数据,最终建立工业化多肽生产过程的质量评价体系。
方法: 一维下,通过对乙腈和水的比例,流动相中三氟乙酸比例,以及流速的筛选确定色谱柱条件为KromasilC18 柱(4.6 mm×150 mm5μm);流动相为乙腈-水(80∶20);流速为0.6mL/min,柱温为25 ℃;检测波长为228 nm;进样量10μL;通过十通阀门的切换来实现二维。经筛选分子量10K部分切换时间为4min5min6min7min9min,10min。二维下,色谱条件为右泵色谱柱为KromasilC18 柱(4.6 mm×150 mm5μm),左泵色谱柱为凝胶柱;右泵流动相为乙腈-水(各含0.1%的三氟乙酸),左泵流动相为0.02%的曡氮钠溶液 ,;右泵流速为0.3mL/min,左泵流速为0.6mL/min,柱温为25 ℃;检测波长为228 nm;进样量10μL;
结果:通过二维液相后,分子量小于3K的组分峰数量由4个变成8个,平均峰面积102.064mAUR26;min变成754.335mAUR26;min,时间跨度由0.955min变成3.5min。分子量小于5K的组分峰数量由5个变成6-7个,平均峰面积139.877mAUR26;min变成2362.554mAUR26;min,时间跨度由1.165min变成4.927min。分子量大于10K的组分峰数量由2个变成7-8个,平均峰面积23.0365mAUR26;min变成2164.508mAUmR26;in,时间跨度由1.047min变成4.186min。可见在峰数量,均峰面积和均峰时间跨度上,3种样品均有增加。
讨论:该方法可用于玉米多肽分子量10K等多组分的分离


关键词:高效液相色谱;二维;蛋白含量测定;超声;纯化