农药西维因间接酶联免疫分析方法的建立.doc
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农药西维因间接酶联免疫分析方法的建立,1.42万字32页 原创作品，已通过查重系统 摘 要本文以氨基甲酸酯类杀虫剂西维因为研究对象，根据已合成的一种西维因结构类似物的半抗原通过与载体蛋白（klh，bsa，ova）分别进行偶联，制备免疫原(h-klhh-bsa)和包被原（h-ova）。通过免疫新西兰大白兔，定期进行效价检测...
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农药西维因间接酶联免疫分析方法的建立
1.42万字 32页 原创作品，已通过查重系统
摘 要
本文以氨基甲酸酯类杀虫剂西维因为研究对象，根据已合成的一种西维因结构类似物的半抗原通过与载体蛋白（KLH，BSA，OVA）分别进行偶联，制备免疫原(H-KLHH-BSA)和包被原（H-OVA）。通过免疫新西兰大白兔，定期进行效价检测，通过采血获取效价和特性较高的抗血清并通过Protein A－Sepharose 4B作亲合层析介质纯化抗血清得到特异性的西维因抗体，并初步建立了西维因的酶联免疫分析方法。
本实验选取6只新西兰大白兔，其中1、2、3、4号兔子的免疫原采用的是DCC和NHS偶联剂将半抗原与载体蛋白进行偶联，12号载体为KLH蛋白，34号载体为BSA。5、6号兔子的免疫原采用EDC和NHS偶联，载体蛋白为KLH。通过对新西兰大白兔进行免疫发现，第五次加强免疫以后，3号抗血清效价和特异性达到一个相对较高的平台期，取3号全血并采用Protein A－Sepharose 4B作亲合层析介质纯化抗血清方法制备了针对西维因的抗体，其浓度为2.83mg/ml。
通过优化抗体包被量，得到最佳抗体包被量为每孔1ug，采用间接竞争法初步建立了西维因ELISA检测方法，得到IC50=3.58mg/kg，IC10=1.51mg/kg。
关键词：西维因；完全抗原；抗体；酶联免疫吸附分析
1.42万字 32页 原创作品，已通过查重系统
摘 要
本文以氨基甲酸酯类杀虫剂西维因为研究对象，根据已合成的一种西维因结构类似物的半抗原通过与载体蛋白（KLH，BSA，OVA）分别进行偶联，制备免疫原(H-KLHH-BSA)和包被原（H-OVA）。通过免疫新西兰大白兔，定期进行效价检测，通过采血获取效价和特性较高的抗血清并通过Protein A－Sepharose 4B作亲合层析介质纯化抗血清得到特异性的西维因抗体，并初步建立了西维因的酶联免疫分析方法。
本实验选取6只新西兰大白兔，其中1、2、3、4号兔子的免疫原采用的是DCC和NHS偶联剂将半抗原与载体蛋白进行偶联，12号载体为KLH蛋白，34号载体为BSA。5、6号兔子的免疫原采用EDC和NHS偶联，载体蛋白为KLH。通过对新西兰大白兔进行免疫发现，第五次加强免疫以后，3号抗血清效价和特异性达到一个相对较高的平台期，取3号全血并采用Protein A－Sepharose 4B作亲合层析介质纯化抗血清方法制备了针对西维因的抗体，其浓度为2.83mg/ml。
通过优化抗体包被量，得到最佳抗体包被量为每孔1ug，采用间接竞争法初步建立了西维因ELISA检测方法，得到IC50=3.58mg/kg，IC10=1.51mg/kg。
关键词：西维因；完全抗原；抗体；酶联免疫吸附分析
