副溶血弧菌tdh基因敲除研究.doc
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副溶血弧菌tdh基因敲除研究,studies on the knock-out of tdh gene of vibrio parahaemolyticus2万字 42页 原创作品，已通过查重系统摘要副溶血弧菌是一种嗜盐性细菌，存在于近海岸的海水和鱼类、贝类等产品中，可引起食物中毒，如腹泻、反应性关节炎和心脏疾病等。副溶...
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副溶血弧菌tdh基因敲除研究
Studies on the knock-out of tdh gene of Vibrio parahaemolyticus
2万字 42页 原创作品，已通过查重系统
摘要
副溶血弧菌是一种嗜盐性细菌，存在于近海岸的海水和鱼类、贝类等产品中，可引起食物中毒，如腹泻、反应性关节炎和心脏疾病等。副溶血弧菌的主要致病因子是其产生的多种溶血毒素，包括热稳定直接溶血素（TDH)、热不稳定溶血素(TLH)和TDH相对溶血毒素(TRH)。临床分离的菌株大多是tdh+株，即神奈川实验阳性菌株，TDH被公认为是副溶血弧菌最主要的致病因子。本研究利用pDS132自杀载体敲除副溶血弧菌的tdh基因，获得tdh基因缺失菌株。此研究可望在降低副溶血弧菌毒性方面发挥一定的作用。
本课题主要研究结果如下：
（1）测定Vp-35，Vp-62，Vp-73在不同培养时段的OD值，并绘制了副溶血弧菌的生长曲线。发现在不同的生长时间段，tdh-菌株Vp-35的OD值明显高于其他两株tdh+菌株，而tdh+菌株Vp-62的OD较低。且在生长30 h时，tdh-菌株的OD值与tdh+菌株之间存在显著性差异。
（2）利用纸片扩散法和牛津杯法测定Vp-35，Vp-62，Vp-73的耐药性。Vp-35对氯霉素、头孢哌酮、红霉素的敏感度明显高于Vp-62、Vp-73。氯霉素对三株菌的抑菌作用与卡那霉素、氨苄霉素、G418、新霉素之间有显著性差异，即Vp对氯霉素最敏感。因此氯霉素是最佳的筛选标记基因。
（3）采用融合PCR技术将tdh目的基因上下游同源臂融合。成功扩增出tdh2的前后同源臂，并融合PCR，凝胶电泳证明Vp-73的融合产物。融合的片段大小约为800 bp，与PCR产物大小相符。但融合PCR产物凝胶电泳亮带不够明显，需要进一步鉴定。
关键词：副溶血弧菌；基因敲除；自杀载体；TDH；耐药性
Studies on the knock-out of tdh gene of Vibrio parahaemolyticus
2万字 42页 原创作品，已通过查重系统
摘要
副溶血弧菌是一种嗜盐性细菌，存在于近海岸的海水和鱼类、贝类等产品中，可引起食物中毒，如腹泻、反应性关节炎和心脏疾病等。副溶血弧菌的主要致病因子是其产生的多种溶血毒素，包括热稳定直接溶血素（TDH)、热不稳定溶血素(TLH)和TDH相对溶血毒素(TRH)。临床分离的菌株大多是tdh+株，即神奈川实验阳性菌株，TDH被公认为是副溶血弧菌最主要的致病因子。本研究利用pDS132自杀载体敲除副溶血弧菌的tdh基因，获得tdh基因缺失菌株。此研究可望在降低副溶血弧菌毒性方面发挥一定的作用。
本课题主要研究结果如下：
（1）测定Vp-35，Vp-62，Vp-73在不同培养时段的OD值，并绘制了副溶血弧菌的生长曲线。发现在不同的生长时间段，tdh-菌株Vp-35的OD值明显高于其他两株tdh+菌株，而tdh+菌株Vp-62的OD较低。且在生长30 h时，tdh-菌株的OD值与tdh+菌株之间存在显著性差异。
（2）利用纸片扩散法和牛津杯法测定Vp-35，Vp-62，Vp-73的耐药性。Vp-35对氯霉素、头孢哌酮、红霉素的敏感度明显高于Vp-62、Vp-73。氯霉素对三株菌的抑菌作用与卡那霉素、氨苄霉素、G418、新霉素之间有显著性差异，即Vp对氯霉素最敏感。因此氯霉素是最佳的筛选标记基因。
（3）采用融合PCR技术将tdh目的基因上下游同源臂融合。成功扩增出tdh2的前后同源臂，并融合PCR，凝胶电泳证明Vp-73的融合产物。融合的片段大小约为800 bp，与PCR产物大小相符。但融合PCR产物凝胶电泳亮带不够明显，需要进一步鉴定。
关键词：副溶血弧菌；基因敲除；自杀载体；TDH；耐药性
