gluconacetobacter diazotrophicus木糖醇脱氢酶基因的克隆及生物信息学分析.doc

摘   要

   

    木糖醇是一种天然糖醇，被人体吸收无副作用，可作为蔗糖的替代品。此外，木糖醇被广泛地应用于化学、医药工业等领域，其需求量在国内外日益增大。近年来，以资源富足的葡萄糖作为底物转化生成木糖醇的微生物合成法受到人们重视。但其转化效率不容乐观，而木糖醇脱氢酶（XDH）是影响生物合成木糖醇的关键酶，对Gluconacetobacter diazotrophicus木糖醇脱氢酶基因进行分析和特点研究，可以为构建高活力XDH工程菌提供基础。

论文以水果市场的普通甘蔗根部为材料，提取宏基因组，设计引物并通过PCR扩增G. diazotrophicus木糖醇脱氢酶基因，连接T载体并进行测序分析。分析结果显示，所获得的克隆基因长度约为800bp,与GenBank已报道的G. diazotrophicus PAl 5的木糖醇脱氢酶基因的序列相似度为99%;其氨基酸序列与GenBank 已报道的G. diazotrophicus PAl 5的脱氢酶的氨基酸序列相似度为99%；而与Gluconobacter oxydans 621H的木糖醇脱氢酶有74%的相似性。其中，起始密码子是：ATG，终止密码子为：TAA，序列包括3个潜在的ORF编码信息，并发现不能切割此序列的常用限制性内切酶有Hind III，Nco I。同时，本研究对木糖醇脱氢酶的氨基酸序列进行了分析，结果显示该酶含有二十种氨基酸