不同强度周期性压力对组织工程软骨的影响(47页).rar
不同强度周期性压力对组织工程软骨的影响(47页),中文摘要目的:在周期性压力环境下进行组织工程软骨的体外构建，探讨不同强度的周期性压力对组织工程软骨构建的影响。方法:处死出生3一5天新西兰兔4只，酒精浸泡消毒后取四肤关节软骨。将软骨剪碎至约1~“大小，用0.25%的胰蛋白酶和0.2%的h型胶原酶依次消化后获取软骨细胞。体外扩增培养至第二代后，收集细胞。将软骨细胞分别接...
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内容介绍
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中文摘要
目的:
在周期性压力环境下进行组织工程软骨的体外构建，探讨不同强
度的周期性压力对组织工程软骨构建的影响。
方法:
处死出生3一5天新西兰兔4只，酒精浸泡消毒后取四肤关节软骨。
将软骨剪碎至约1~“大小，用0.25%的胰蛋白酶和0.2%的H型胶原
酶依次消化后获取软骨细胞。体外扩增培养至第二代后，收集细胞。
将软骨细胞分别接种于smm巧mm大小的PLGA无纺网支架，待细胞
充分贴壁后，随机分为四组，每组10个支架。其中三组为实验组，置
于由资B一40型旋转式生物反应器和往复式加压泵组成的“周期性加压
培养系统”内培养，分别施加强度为0一50KPa、0一100勒a、O一ZooKPa，
频率0.1比的周期性压力，另一组不加压，为对照组。所有细胞一支架复
合物培养2周后，肉眼观察所获组织工程软骨的外观，HE染色观察
各组软骨细胞的形态及分布，甲苯胺蓝染色观察各组软骨细胞糖氨多
糖(GAG)分泌，11型胶原免疫组织化学染色方法观察各组软骨细胞
11型胶原分泌，检侧三组周期性压力组和对照组的组织工程软骨11型
胶原和糖氨多糖(GAG)含量。
结果:
20OKPa组工程软骨体积最大，最厚，表面光滑，有光泽，弹性好。
H卫染色可见软骨细胞增殖最旺盛，排列紧密，分布均匀，细胞被大量
EcM包围，融合成片，可见软骨陷窝。甲苯胺蓝染色可见切片紫蓝着
色，颜色很深，质地较密，分布均匀。11型胶原免疫组织化学染色阳
性显色，呈棕黄色，采用图像分析系统对棕黄色染色面积计数，H型
胶原免疫组织化学染色可见11型胶原染色面积百分比最高
(52.44士1.87%，p<0.01)，GAG含量最高(476.33士25.66协g，p<0.01)。
100KPa组和50KPa组次之。对照组组织工程软骨体积较小，厚度较薄，
表面欠光整，质软，弹性差。HE染色可见细胞分布散乱，ECM较少，
未融合成片。甲苯胺蓝染色可见着色较浅，分布不均。11型胶原染色
面积百分比最低(41.05士6.28%，P<0.01)，GAG含量最低
(220.00士12.14林g，P<0.01)。
结论:
组织工程软骨细胞增殖和合成11型胶原、GAG受周期性压力强
度的调控，其中频率0.IHz、强度200KPa的周期性压力能更好地促进
软骨细胞增殖，合成11型胶原、GAG等细胞外基质。
关键词:软骨细胞;压力;强度;组织工程
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在周期性压力环境下进行组织工程软骨的体外构建，探讨不同强
度的周期性压力对组织工程软骨构建的影响。
方法:
处死出生3一5天新西兰兔4只，酒精浸泡消毒后取四肤关节软骨。
将软骨剪碎至约1~“大小，用0.25%的胰蛋白酶和0.2%的H型胶原
酶依次消化后获取软骨细胞。体外扩增培养至第二代后，收集细胞。
将软骨细胞分别接种于smm巧mm大小的PLGA无纺网支架，待细胞
充分贴壁后，随机分为四组，每组10个支架。其中三组为实验组，置
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培养系统”内培养，分别施加强度为0一50KPa、0一100勒a、O一ZooKPa，
频率0.1比的周期性压力，另一组不加压，为对照组。所有细胞一支架复
合物培养2周后，肉眼观察所获组织工程软骨的外观，HE染色观察
各组软骨细胞的形态及分布，甲苯胺蓝染色观察各组软骨细胞糖氨多
糖(GAG)分泌，11型胶原免疫组织化学染色方法观察各组软骨细胞
11型胶原分泌，检侧三组周期性压力组和对照组的组织工程软骨11型
胶原和糖氨多糖(GAG)含量。
结果:
20OKPa组工程软骨体积最大，最厚，表面光滑，有光泽，弹性好。
H卫染色可见软骨细胞增殖最旺盛，排列紧密，分布均匀，细胞被大量
EcM包围，融合成片，可见软骨陷窝。甲苯胺蓝染色可见切片紫蓝着
色，颜色很深，质地较密，分布均匀。11型胶原免疫组织化学染色阳
性显色，呈棕黄色，采用图像分析系统对棕黄色染色面积计数，H型
胶原免疫组织化学染色可见11型胶原染色面积百分比最高
(52.44士1.87%，p<0.01)，GAG含量最高(476.33士25.66协g，p<0.01)。
100KPa组和50KPa组次之。对照组组织工程软骨体积较小，厚度较薄，
表面欠光整，质软，弹性差。HE染色可见细胞分布散乱，ECM较少，
未融合成片。甲苯胺蓝染色可见着色较浅，分布不均。11型胶原染色
面积百分比最低(41.05士6.28%，P<0.01)，GAG含量最低
(220.00士12.14林g，P<0.01)。
结论:
组织工程软骨细胞增殖和合成11型胶原、GAG受周期性压力强
度的调控，其中频率0.IHz、强度200KPa的周期性压力能更好地促进
软骨细胞增殖，合成11型胶原、GAG等细胞外基质。
关键词:软骨细胞;压力;强度;组织工程
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