应用旋转式生物反应器体外构建组织工程软骨的实验研究(62页).rar
应用旋转式生物反应器体外构建组织工程软骨的实验研究(62页),目的:探讨应用hfb一40型旋转式生物反应器对构建组织工程软骨的影响。方法:无菌条件下解剖分离3一5天龄胎兔四肤关节软骨，将软骨片剪碎至约lmm3大小，再用0.25%的胰蛋白酶和0.2%的h型胶原酶依次消化后获取软骨细胞。体外扩增至第2代后，收集细胞并调整细胞浓度至4x107/ml，将所得软骨细胞接种于一mmx4mmx...
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内容介绍
原文档由会员 白痴学东西 发布
目的:
探讨应用HFB一40型旋转式生物反应器对构建组织工程软骨的影
响。
方法:
无菌条件下解剖分离3一5天龄胎兔四肤关节软骨，将软骨片剪碎
至约lmm3大小，再用0.25%的胰蛋白酶和0.2%的H型胶原酶依次消
化后获取软骨细胞。体外扩增至第2代后，收集细胞并调整细胞浓度
至4x107/ml，将所得软骨细胞接种于一mmx4mmx4mm大小长方体聚
乳酸聚羚基乙酸聚合物(PLGA)支架上，培养一周后，随机分成A、
B两组，每组10个支架。A组为实验组，培养于生物反应器内;B
组为对照组，培养于普通培养瓶内。A组生物反应器转速维持在15一30
转/分钟，保持软骨细胞一PLGA支架复合物在震荡环境下保持悬浮状
态，每2一3天换液50%一60%;B组软骨细胞一PLGA支架复合物在静
止的培养瓶培养。A、B两组连续培养4周。4周后采用HE染色法
观察组织工程软骨细胞增殖及分布;甲苯胺蓝染色观察软骨细胞硫酸
糖氨多糖(GAG)的分泌和分布;H型胶原免疫组织化学染色观察
软骨细胞H型胶原分泌和分布，并用Image一pr叩lus图象分析系统对
H型胶原免疫组织化学染色切片行11型胶原半定量分析;并用1，9
南京医科大学硕士学位论文
二甲基亚甲蓝法和小牛胸腺DNA法定量检测软骨细胞一PLGA支架
复合物的GAG和DNA含量。
结果:
A组软骨细胞一PLGA支架复合物体积较大、较厚，表面光滑，
弹性和光泽也明显优于B组，两组复合物匪染色组织学和甲苯胺蓝
染色观察结果显示A组软骨细胞的生长情况明显优于B组;A、B两
组11型胶原染色面积百分比分另，{为(94.71士0.46)%和(63.87士1.39)
%:GAG含量分另，{为459.167士4.682和335.282士5.110:DNA含量分
别为14.25士0.147和10.84士0.112。两组之间11型胶原染色面积百分比、
GAG含量和DNA含量差异均十分明显，有统计学意义(p<0.01)。
结论:
应用排B一40型旋转式生物反应器，能够提供更加有牙」于软骨细
胞在PLGA中生长的外部环境，促进软骨细胞增殖，并增加H型胶原、
GAG等细胞外基质的合成，更有牙j于组织工程软骨的形成。
关健词:
软骨细胞排B一40型旋转式生物反应器组织工程
探讨应用HFB一40型旋转式生物反应器对构建组织工程软骨的影
响。
方法:
无菌条件下解剖分离3一5天龄胎兔四肤关节软骨，将软骨片剪碎
至约lmm3大小，再用0.25%的胰蛋白酶和0.2%的H型胶原酶依次消
化后获取软骨细胞。体外扩增至第2代后，收集细胞并调整细胞浓度
至4x107/ml，将所得软骨细胞接种于一mmx4mmx4mm大小长方体聚
乳酸聚羚基乙酸聚合物(PLGA)支架上，培养一周后，随机分成A、
B两组，每组10个支架。A组为实验组，培养于生物反应器内;B
组为对照组，培养于普通培养瓶内。A组生物反应器转速维持在15一30
转/分钟，保持软骨细胞一PLGA支架复合物在震荡环境下保持悬浮状
态，每2一3天换液50%一60%;B组软骨细胞一PLGA支架复合物在静
止的培养瓶培养。A、B两组连续培养4周。4周后采用HE染色法
观察组织工程软骨细胞增殖及分布;甲苯胺蓝染色观察软骨细胞硫酸
糖氨多糖(GAG)的分泌和分布;H型胶原免疫组织化学染色观察
软骨细胞H型胶原分泌和分布，并用Image一pr叩lus图象分析系统对
H型胶原免疫组织化学染色切片行11型胶原半定量分析;并用1，9
南京医科大学硕士学位论文
二甲基亚甲蓝法和小牛胸腺DNA法定量检测软骨细胞一PLGA支架
复合物的GAG和DNA含量。
结果:
A组软骨细胞一PLGA支架复合物体积较大、较厚，表面光滑，
弹性和光泽也明显优于B组，两组复合物匪染色组织学和甲苯胺蓝
染色观察结果显示A组软骨细胞的生长情况明显优于B组;A、B两
组11型胶原染色面积百分比分另，{为(94.71士0.46)%和(63.87士1.39)
%:GAG含量分另，{为459.167士4.682和335.282士5.110:DNA含量分
别为14.25士0.147和10.84士0.112。两组之间11型胶原染色面积百分比、
GAG含量和DNA含量差异均十分明显，有统计学意义(p<0.01)。
结论:
应用排B一40型旋转式生物反应器，能够提供更加有牙」于软骨细
胞在PLGA中生长的外部环境，促进软骨细胞增殖，并增加H型胶原、
GAG等细胞外基质的合成，更有牙j于组织工程软骨的形成。
关健词:
软骨细胞排B一40型旋转式生物反应器组织工程
