植物亚细胞结构叶绿体的dna提取.rar
植物亚细胞结构叶绿体的dna提取,11页8000余字摘 要2前 言2一、材料、试剂和仪器 3 1、 材料32、试剂33、仪器4二、操作方法41、叶绿体的制备 41.1 叶绿体的分离提取41.2 提纯41.2.1制备蔗糖梯度41.2.2 叶绿体的纯化41.3 镜检42、叶绿体dna的提取52.1 dna的提取52.2 沉淀dna53、所得dna检验分析5...
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内容介绍
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11页8000余字
摘 要………………………………………………………………………………………2
前 言………………………………………………………………………………………2
一、材料、试剂和仪器 ………………………………………………………………3
1、 材料………………………………………………………………3
2、试剂………………………………………………………………3
3、仪器………………………………………………………………4
二、操作方法………………………………………………………………4
1、 叶绿体的制备 ………………………………………………………………4
1.1 叶绿体的分离提取…………………………………………………4
1.2 提纯………………………………………………………………4
1.2.1 制备蔗糖梯度……………………………………………………4
1.2.2 叶绿体的纯化……………………………………………………4
1.3 镜检……………………………………………………………4
2、叶绿体DNA的提取……………………………………………………………5
2.1 DNA的提取………………………………………………………………5
2.2 沉淀DNA………………………………………………………………5
3、所得DNA检验分析……………………………………………………………5
3.1 核酸浓度测定…………………………………………………………5
3.2琼脂糖凝胶电泳…………………………………………………………5
三、结果…………………………………………………………6
1、 图片………………………………………………………………6
2、 外分光光度检测结果……………………………………………………7
四、讨论和分析………………………………………………………………7
参考文献……………………………………………………………9
[摘 要] 采用菠菜绿叶为材料，通过差速离心分离、密度梯度离心分离纯化出叶绿体。显微镜下观察所得叶绿体纯度、形态及结构，得到椭圆、球形的叶绿体。样品用SDS、蛋白酶K、核酸酶处理后，用苯酚/氯仿及氯仿/异戊醇抽提处理提取。纯化提出的ctDNA用紫外分光光度计检测提取浓度，1%琼脂糖电泳得到清晰而整齐的条带。
[关键词] 叶绿体 差速离心 密度梯度离心 ctDNA
Distill the DNA of the Plant Subcellular Chloroplast
Abstract： Distill the chloroplast from thespinachleaves by the differential centrifugation and pure them by the density gradient centrifugation. Examine the concentration and shape of these chloroplast from microscope.We saw round and ellipse chloroplast. Then treat the chloroplast with SDS, Dnase and proteinase. After that , we can extract the ctDNA (chloroplast DNA) with phenol/chloroform and chloroform/isoamyl alcohol. Examine this extractive with the 1% agrose electrophoresis and the quantity of the ctDNa with spectrophotometer, and the strip of it is quite regular and clear.
Key Words: chloroplast differential centrifugation density gradient centrifugation ctDNa
参考文献
[1] 张知良，植物生物化学技术与方法，农业出版社，1986
[2] 陈毓荃主编，生物化学试验方法和技术，世界图书出版公司，1999
[3] 翟中和主编，细胞生物学，高等教育出版社，2000
[4] 张七仙、刘俊起、李成霞等著。一种简捷的同时提取植物总DNA和总RNA的方法，中国农业大学生物技术国家重点实验室，2001
[5] 李大力，一种从复含次生物质的植物中提取DNA的方法，南京理工大学学报，2001，25（5）
[6] 曹凯鸣，核酸化学导论，复旦大学出版社，1991
[7] 刘祥等，分子细胞生物学实验技术，首都师范大学出版社，2001
[8] 顾红雅等著，植物基因与分子操作，北京大学出版社，1995
[9] 张自立、俞大新著，植物细胞和体细胞遗传学技术与原理，科学出版社1985
[10] 沈志伟、孙崇荣、朱俭，水稻叶绿体DNA的提取和纯化，生物化学杂志，1989，5（1）
[11] B T Porse,Roger A Garrett. Ribosomal Mechanics,Antibodies and GTP Hydrolysis.Cell,1999(97)423-426
[12] Bottomley,W.,Spencer，D.and Whitfeld，P.R.,1974 Arch.Biochem.Biophys.，164：106－117
[13] Reeves，S.G..and Hall，D.O.，1980.Methods in Enzymology，Vol.69，pp.85-94
[14] 上海植物生理学会编， 植物生理学试验手册，上海科学技术出版社，1985
[15] 郭蔼光，基础生物化学，高等教育出版社 ，2001
[16] Sala，F.，Amileni，A.R.，Parisi，B. and Spadari，S.，1980. Eur.J.Biochem.，112：211－217
[17] Walkar，D.A.，1980.Methods in Enzymology，Vol.69，pp.94-104
[18] 龚小松、阎隆飞，高等植物叶绿体DNA提纯方法的改进，科学通报，1990年，第6期
摘 要………………………………………………………………………………………2
前 言………………………………………………………………………………………2
一、材料、试剂和仪器 ………………………………………………………………3
1、 材料………………………………………………………………3
2、试剂………………………………………………………………3
3、仪器………………………………………………………………4
二、操作方法………………………………………………………………4
1、 叶绿体的制备 ………………………………………………………………4
1.1 叶绿体的分离提取…………………………………………………4
1.2 提纯………………………………………………………………4
1.2.1 制备蔗糖梯度……………………………………………………4
1.2.2 叶绿体的纯化……………………………………………………4
1.3 镜检……………………………………………………………4
2、叶绿体DNA的提取……………………………………………………………5
2.1 DNA的提取………………………………………………………………5
2.2 沉淀DNA………………………………………………………………5
3、所得DNA检验分析……………………………………………………………5
3.1 核酸浓度测定…………………………………………………………5
3.2琼脂糖凝胶电泳…………………………………………………………5
三、结果…………………………………………………………6
1、 图片………………………………………………………………6
2、 外分光光度检测结果……………………………………………………7
四、讨论和分析………………………………………………………………7
参考文献……………………………………………………………9
[摘 要] 采用菠菜绿叶为材料，通过差速离心分离、密度梯度离心分离纯化出叶绿体。显微镜下观察所得叶绿体纯度、形态及结构，得到椭圆、球形的叶绿体。样品用SDS、蛋白酶K、核酸酶处理后，用苯酚/氯仿及氯仿/异戊醇抽提处理提取。纯化提出的ctDNA用紫外分光光度计检测提取浓度，1%琼脂糖电泳得到清晰而整齐的条带。
[关键词] 叶绿体 差速离心 密度梯度离心 ctDNA
Distill the DNA of the Plant Subcellular Chloroplast
Abstract： Distill the chloroplast from thespinachleaves by the differential centrifugation and pure them by the density gradient centrifugation. Examine the concentration and shape of these chloroplast from microscope.We saw round and ellipse chloroplast. Then treat the chloroplast with SDS, Dnase and proteinase. After that , we can extract the ctDNA (chloroplast DNA) with phenol/chloroform and chloroform/isoamyl alcohol. Examine this extractive with the 1% agrose electrophoresis and the quantity of the ctDNa with spectrophotometer, and the strip of it is quite regular and clear.
Key Words: chloroplast differential centrifugation density gradient centrifugation ctDNa
参考文献
[1] 张知良，植物生物化学技术与方法，农业出版社，1986
[2] 陈毓荃主编，生物化学试验方法和技术，世界图书出版公司，1999
[3] 翟中和主编，细胞生物学，高等教育出版社，2000
[4] 张七仙、刘俊起、李成霞等著。一种简捷的同时提取植物总DNA和总RNA的方法，中国农业大学生物技术国家重点实验室，2001
[5] 李大力，一种从复含次生物质的植物中提取DNA的方法，南京理工大学学报，2001，25（5）
[6] 曹凯鸣，核酸化学导论，复旦大学出版社，1991
[7] 刘祥等，分子细胞生物学实验技术，首都师范大学出版社，2001
[8] 顾红雅等著，植物基因与分子操作，北京大学出版社，1995
[9] 张自立、俞大新著，植物细胞和体细胞遗传学技术与原理，科学出版社1985
[10] 沈志伟、孙崇荣、朱俭，水稻叶绿体DNA的提取和纯化，生物化学杂志，1989，5（1）
[11] B T Porse,Roger A Garrett. Ribosomal Mechanics,Antibodies and GTP Hydrolysis.Cell,1999(97)423-426
[12] Bottomley,W.,Spencer，D.and Whitfeld，P.R.,1974 Arch.Biochem.Biophys.，164：106－117
[13] Reeves，S.G..and Hall，D.O.，1980.Methods in Enzymology，Vol.69，pp.85-94
[14] 上海植物生理学会编， 植物生理学试验手册，上海科学技术出版社，1985
[15] 郭蔼光，基础生物化学，高等教育出版社 ，2001
[16] Sala，F.，Amileni，A.R.，Parisi，B. and Spadari，S.，1980. Eur.J.Biochem.，112：211－217
[17] Walkar，D.A.，1980.Methods in Enzymology，Vol.69，pp.94-104
[18] 龚小松、阎隆飞，高等植物叶绿体DNA提纯方法的改进，科学通报，1990年，第6期
