鸭rab27a基因片段克隆及表达分析.doc
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鸭rab27a基因片段克隆及表达分析,①页数:11页②字数：13557字③ 摘要：rab27a基因编码rab基因家族的rab27a蛋白（ras like gtp-binding protein 27a），为黑色素细胞特有蛋白质运输的关键基因。rab27a基因可以作为鸭黑羽性状的候选基因。本研究用pcr方法扩增了鸭rab27a基因的部分编码区序列并进行测序及...
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①页数:11页
②字数：13557字
③ 摘要：RAB27A基因编码Rab基因家族的Rab27a蛋白（Ras like GTP-binding protein 27A），为黑色素细胞特有蛋白质运输的关键基因。RAB27A基因可以作为鸭黑羽性状的候选基因。本研究用PCR方法扩增了鸭RAB27A基因的部分编码区序列并进行测序及序列同源性分析；利用半定量RT-PCR方法分析了鸭RAB27A基因在组织表达的情况。结果表明，所克隆的鸭RAB27A基因片段为469bp，该基因与已报道的鸡RAB27A基因核苷酸序列相似性为96 %；此基因仅在皮肤、肌肉和肝脏组织中表达，其中皮肤的表达量最高，但在小肠、心脏、卵巢、肾脏、脾脏、肌胃组织中未见表达；在各代鸭皮肤组织样中，亲本连城白鸭和白改鸭皮肤组织未见表达，而杂交子代皮肤有表达，且子代黑羽皮肤中表达量高于白羽皮肤。
④目录：
摘要 Ⅱ
关键词 Ⅱ
Abstract Ⅱ
Key words Ⅱ
1 前言 1
1.1 研究背景 1
1.2 RAB27A基因研究进展 1
1.3 研究目的 2
2 材料与方法 2
2.1材料 2
2.1.1 实验样品 2
2.1.2 实验试剂 2
2.1.3 主要仪器设备 2
2.2 方法 2
2.2.1 各组织总RNA的提取 2
2.2.2 各组织cDNA第一链的合成 3
2.2.3 引物的设计 3
2.2.4 PCR扩增反应 3
2.2.5 PCR产物回收与测序 4
2.2.6 cDNA序列的同源性分析 4
2.2.7 组织表达谱分析 4
3 结果与分析 4
3.1 RT-PCR扩增结果 4
3.2 鸭RAB27A基因的测序结果与同源性分析 5
3.3 组织表达谱分析 6
4 讨论 8
4.1 鸭RAB27A基因的保守性 8
4.2 鸭RAB27A基因的组织表达谱分析 8
5 小结 9
参考文献 9
⑤关键字：鸭；RAB27A基因；克隆；表达分析
⑥参考文献：
1. 程宽维，江宵兵，章双杰．连城白鸭资源特性、保护及开发方向．中国家禽，2003，25：46-48
2. 刘敬顺．家鸡羽色遗传及应用．养禽与禽病防治，1995，4：15-16
3. 刘甲斐，仇雪梅．黑色素及其相关基因的研究进展．生物技术通报，2002，4：55-58
4. 帕它木•莫合买提，洪新宇，金锡鹏．皮肤黑素细胞Rab27a基因与黑素小体的转运．中华现代皮肤科学杂志，2004，1：230-232
5. 王建涛，李祥龙，周荣艳等．不同物种RAB27A基因完整编码区生物信息学分析．中国农学通报，2007，23：64-67
6. 吴文林，吴穗洁．Rab蛋白的结构、功能与研究展望．台湾海峡，2006，25：599-605
7. 杨永升．鸡MC1R基因的SNPs分析与染色体定位．[博士学位论文]．杭州：浙江大学图书馆，2004
8. 应牡英, 夏涛, 陈小冬．梅山猪Ghrelin和Motilin基因克隆、结构分析及组织表达谱．江西农业大学学报，2006，28（4）：559-565
9. 曾瑞霞, 苏玉虹, 巴彩凤等. 猪ERK6基因编码区的克隆及组织表达谱分析. 中国兽医科学，2006，36 (11) ：910-914
10. 张瑞杰，许杰，王增权等. 利用基因表达谱对组织样品分类方法的研究. 中国卫生统计，2003，20（1）：22-25
11. Bohadoran P, Aberdam E, Mantoux F, et al. Rab27a:A key to melanosome transport in human melanocytes. J Cell Biol, 2001, 152 (4) : 843-850
12. Hume A N, Collinson L M, Rapa K A, et al. Rab27a regulates the peripheral distribution of melanosomes in melanocytes. J Cell Biol, 2001, 152 (4) : 795-808
13. Kuroda T S, Fukuda M, Ariga H, et al. The Slp homology domain of synaptotagmin-like proteins 1–4 and Slac2 functions as a novel Rab27A binding domain. J Biol Chem, 2002 , 277: 9212–9218
14. Provance D W, Wei W, Ipe V, et al. Cultured melanocytes from dilute mice exhibit dendritic morphology and altered melanosome distribution. Proc Natl Acad Sci , 1996, 93:14554–14558
15. Provance D W, James T L, Mercer J A. Melanophilin, the product of the leaden locus, is required for targeting of myosin-Va to melanosomes. Traffic, 2002, 3: 124-132
16. Rudolf R, Kogel T, Kuzne S A, et al. Myosin Va facilitates the distribution of secretory granules in the F-actin rich cortex of PC12 cells. J Cell Sci, 2003, 116: 1339–1348
17. Tolmachova T, Anders R, Stinchcombe J, et al. A general role for Rab27a in secretory cells. Mol Biol Cell, 2004, 15: 332-344
18. Wilson S M, Yip R, Swing D A, et al. A mutation in Rab27a causes the vesicle transport defects observed in ashen mice . PNAS , 2000, 97(14): 7933-7938
19. Wu X, Bowers B, Rao K, et al. Visualization of melanosome dynamics within wild-type and dilute melanocytes suggests a paradigm for myosin V function in vivo. J Cell Biol, 1998, 143, 1899–1918
20. Zerial M, McBride H. Rab proteins as membrane organizers. Nat Rev Mol Cell Biol, 2002, 2: 107–117
本论文属于本人的毕业论文，数据和结果都还没有发表。
②字数：13557字
③ 摘要：RAB27A基因编码Rab基因家族的Rab27a蛋白（Ras like GTP-binding protein 27A），为黑色素细胞特有蛋白质运输的关键基因。RAB27A基因可以作为鸭黑羽性状的候选基因。本研究用PCR方法扩增了鸭RAB27A基因的部分编码区序列并进行测序及序列同源性分析；利用半定量RT-PCR方法分析了鸭RAB27A基因在组织表达的情况。结果表明，所克隆的鸭RAB27A基因片段为469bp，该基因与已报道的鸡RAB27A基因核苷酸序列相似性为96 %；此基因仅在皮肤、肌肉和肝脏组织中表达，其中皮肤的表达量最高，但在小肠、心脏、卵巢、肾脏、脾脏、肌胃组织中未见表达；在各代鸭皮肤组织样中，亲本连城白鸭和白改鸭皮肤组织未见表达，而杂交子代皮肤有表达，且子代黑羽皮肤中表达量高于白羽皮肤。
④目录：
摘要 Ⅱ
关键词 Ⅱ
Abstract Ⅱ
Key words Ⅱ
1 前言 1
1.1 研究背景 1
1.2 RAB27A基因研究进展 1
1.3 研究目的 2
2 材料与方法 2
2.1材料 2
2.1.1 实验样品 2
2.1.2 实验试剂 2
2.1.3 主要仪器设备 2
2.2 方法 2
2.2.1 各组织总RNA的提取 2
2.2.2 各组织cDNA第一链的合成 3
2.2.3 引物的设计 3
2.2.4 PCR扩增反应 3
2.2.5 PCR产物回收与测序 4
2.2.6 cDNA序列的同源性分析 4
2.2.7 组织表达谱分析 4
3 结果与分析 4
3.1 RT-PCR扩增结果 4
3.2 鸭RAB27A基因的测序结果与同源性分析 5
3.3 组织表达谱分析 6
4 讨论 8
4.1 鸭RAB27A基因的保守性 8
4.2 鸭RAB27A基因的组织表达谱分析 8
5 小结 9
参考文献 9
⑤关键字：鸭；RAB27A基因；克隆；表达分析
⑥参考文献：
1. 程宽维，江宵兵，章双杰．连城白鸭资源特性、保护及开发方向．中国家禽，2003，25：46-48
2. 刘敬顺．家鸡羽色遗传及应用．养禽与禽病防治，1995，4：15-16
3. 刘甲斐，仇雪梅．黑色素及其相关基因的研究进展．生物技术通报，2002，4：55-58
4. 帕它木•莫合买提，洪新宇，金锡鹏．皮肤黑素细胞Rab27a基因与黑素小体的转运．中华现代皮肤科学杂志，2004，1：230-232
5. 王建涛，李祥龙，周荣艳等．不同物种RAB27A基因完整编码区生物信息学分析．中国农学通报，2007，23：64-67
6. 吴文林，吴穗洁．Rab蛋白的结构、功能与研究展望．台湾海峡，2006，25：599-605
7. 杨永升．鸡MC1R基因的SNPs分析与染色体定位．[博士学位论文]．杭州：浙江大学图书馆，2004
8. 应牡英, 夏涛, 陈小冬．梅山猪Ghrelin和Motilin基因克隆、结构分析及组织表达谱．江西农业大学学报，2006，28（4）：559-565
9. 曾瑞霞, 苏玉虹, 巴彩凤等. 猪ERK6基因编码区的克隆及组织表达谱分析. 中国兽医科学，2006，36 (11) ：910-914
10. 张瑞杰，许杰，王增权等. 利用基因表达谱对组织样品分类方法的研究. 中国卫生统计，2003，20（1）：22-25
11. Bohadoran P, Aberdam E, Mantoux F, et al. Rab27a:A key to melanosome transport in human melanocytes. J Cell Biol, 2001, 152 (4) : 843-850
12. Hume A N, Collinson L M, Rapa K A, et al. Rab27a regulates the peripheral distribution of melanosomes in melanocytes. J Cell Biol, 2001, 152 (4) : 795-808
13. Kuroda T S, Fukuda M, Ariga H, et al. The Slp homology domain of synaptotagmin-like proteins 1–4 and Slac2 functions as a novel Rab27A binding domain. J Biol Chem, 2002 , 277: 9212–9218
14. Provance D W, Wei W, Ipe V, et al. Cultured melanocytes from dilute mice exhibit dendritic morphology and altered melanosome distribution. Proc Natl Acad Sci , 1996, 93:14554–14558
15. Provance D W, James T L, Mercer J A. Melanophilin, the product of the leaden locus, is required for targeting of myosin-Va to melanosomes. Traffic, 2002, 3: 124-132
16. Rudolf R, Kogel T, Kuzne S A, et al. Myosin Va facilitates the distribution of secretory granules in the F-actin rich cortex of PC12 cells. J Cell Sci, 2003, 116: 1339–1348
17. Tolmachova T, Anders R, Stinchcombe J, et al. A general role for Rab27a in secretory cells. Mol Biol Cell, 2004, 15: 332-344
18. Wilson S M, Yip R, Swing D A, et al. A mutation in Rab27a causes the vesicle transport defects observed in ashen mice . PNAS , 2000, 97(14): 7933-7938
19. Wu X, Bowers B, Rao K, et al. Visualization of melanosome dynamics within wild-type and dilute melanocytes suggests a paradigm for myosin V function in vivo. J Cell Biol, 1998, 143, 1899–1918
20. Zerial M, McBride H. Rab proteins as membrane organizers. Nat Rev Mol Cell Biol, 2002, 2: 107–117
本论文属于本人的毕业论文，数据和结果都还没有发表。
