小麦硫转运蛋白基因克隆及northern杂交探针的制备.rar

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目录
一、前言………………………………………………………………………3
（一） 硫元素与硫转运蛋白…………………………………………………3
（二）硫转运蛋白的研究……………………………………………………4
（三）本实验的目的与意义…………………………………………………4
二、实验部分…………………………………………………………………4
（一） 材料、试剂和仪器…………………………………………………… 4
1.实验材料…………………………………………………………………4
2.菌株与质粒………………………………………………………………4
3.主要生化试剂……………………………………………………………5
4.主要仪器…………………………………………………………………5
（二）实验方法…………………………………………………………………5
1.材料的准备…………………………………………………………………5
2.目的片段的获得……………………………………………………………5
（1） 总RNA的提取……………………………………………………………5
（2） 反转录…………………………………………………………………5
（3） 引物的设计……………………………………………………………5
（4） PCR扩增获得目的片段…………………………………………………6
3.目的基因的克隆：…………………………………………………………… 6
（1） 连接……………………………………………………………………6
（2） 感受态细胞的制备…………………………………………………… 6
（3） 感受态细胞的转化……………………………………………………6
4.对转化后细胞克隆的检测筛选……………………………………………6
5.Northern杂交探针的标记…………………………………………………6
6.斑点杂交检测探针…………………………………………………………6
三、实验结果…………………………………………………………………7
1.目的片段的PCR扩增…………………………………………………………7
2.目的片段的筛选……………………………………………………………7
3.斑点杂交的实验结果………………………………………………………8
四、讨 论………………………………………………………………………8
参考文献………………………………………………………………………9
致 谢………………………………………………………………………10

小麦硫转运蛋白基因克隆
及Northern杂交探针的制备
摘要 从郑引一号小麦的根组织中提取总RNA，利用RT-PCR的方法获得目的片段，并将它克隆到了pGEM-T Easy克隆载体中，经PCR、酶切、测序，确定获得了目的基因的片断。并利用现报道的其他小麦品种中硫转运蛋白基因序列的比对信息确定出Northern杂交时所需的探针片段，然后用斑点杂交实验，证明获得了所需探针,为进一步研究小麦中硫转运蛋白提供有意义的理论依据。
关键词 小麦，硫转运蛋白基因，基因克隆，Northern杂交

Abstract We distill the total RNA from the root of the wheat—zhengyin No.6. Then using the RT- PCR method to get the purpose gene segment. Combining it with the pGEM-T Easy vector to let it was cloned . it is was proved that we get the purpose gene segment after PCR, enzyme slice and the sequence-checking . And make use of the comparing information about the sequence of sulphate transporter gene in other species of wheat to find out our probe segment in Northern bloting, and did the northern-bloting experiment to make sure we get the needed probe For further study about thesulphate transporter in wheat.
Key words wheat；the gene of sulphate transporter；gene clone；Northern bloting