适合于淡紫拟青霉高效表达的透明颤菌血红蛋白基因的人工构建.doc
约20页DOC格式手机打开展开
适合于淡紫拟青霉高效表达的透明颤菌血红蛋白基因的人工构建,本文共20页 10948字摘要淡紫拟青霉(paecilomyces lilacinus)是一种重要的植物线虫寄生真菌，目前已在数个国家开发为生物杀线菌剂，广泛应用于根结线虫、胞囊线虫等植物寄生线虫的防治工作。在淡紫拟青霉菌剂的大规模高密度的发酵中，供氧成为提高产品...
内容介绍
此文档由会员 孙阳阳 发布
适合于淡紫拟青霉高效表达的透明颤菌血红蛋白基因的人工构建
本文共20页 10948字
摘要
淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)是一种重要的植物线虫寄生真菌，目前已在数个国家开发为生物杀线菌剂，广泛应用于根结线虫、胞囊线虫等植物寄生线虫的防治工作。在淡紫拟青霉菌剂的大规模高密度的发酵中，供氧成为提高产品效价的主要限制因素之一。透明颤菌血红蛋白（VHb）能提高细胞内氧传递效率，为解决供氧限制问题提供了一条新的思路。本研究经人工设计，构建出一种适合于淡紫拟青霉高效表达的透明颤菌血红蛋白（VHb）基因——vgbpl基因。拟借助VHb的作用，使淡紫拟青霉的发酵性能得到改善，在供氧不足时可以获得更高的生长速率，以提高发酵的速度和产品效价。
从Genebank中查找透明颤菌血红蛋白（VHb）的氨基酸序列；根据密码子的简并性以及淡紫拟青霉的密码子偏好性原则，人工设计出vgbpl基因的核甘酸序列；根据重叠PCR的引物设计原则，将核甘酸序列分成6条寡聚核苷酸片段；经重叠PCR，将合成的寡聚核苷酸片段组装成vgbpl基因。经酶切、连接后，将vgbpl基因克隆至真核表达载体pPIC9K中，而构建成重组质粒pPIC9K/vgbpl。重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli )DH5α，采用菌落PCR法对重组子进行筛选，阳性重组子送上海英俊公司进行序列分析。序列分析和比对结果表明，我们获得了序列和阅读框正确的重组质粒pPIC9K/vgbpl。
总之，本研究根据透明颤菌血红蛋白（VHb）的氨基酸序列，人工设计出适合于淡紫拟青霉高效表达的vgbpl基因，通过重叠PCR成功构建出vgbpl基因，并构建了真核表达载体pPIC9K/vgbpl。这些工作为vgbpl基因转入淡紫拟青霉并实现VHb稳定而高效的表达奠定了重要基础。
关键词：淡紫拟青霉；透明颤菌血红蛋白；基因；人工设计；构建
参考文献
[1] Jatala P. Biological control of plant-parasific nematodes [J]. Ann Rev Phytopathol, 1986, 24:435~439.
[2] 陈淑鸿, 高学彪. 淡紫拟青霉MCWA18菌株对爪哇根结线虫卵孵化率的影响[J].中国生物防治,2000,16(2):78~80.
[3] Stirling G R. Biological Control of Plant Parasitic Nematodes Progress, Problems and Prospects. C. A. B International, 1991: 137～ 142
[4] Khan MR, Goswami BK. Evaluation of Paecilomyces lilacinus isolates against Meloidogyne incognita infecting tomato [J]. International Journal of Nematology, 2002, 12(1):111~114.
本文共20页 10948字
摘要
淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)是一种重要的植物线虫寄生真菌，目前已在数个国家开发为生物杀线菌剂，广泛应用于根结线虫、胞囊线虫等植物寄生线虫的防治工作。在淡紫拟青霉菌剂的大规模高密度的发酵中，供氧成为提高产品效价的主要限制因素之一。透明颤菌血红蛋白（VHb）能提高细胞内氧传递效率，为解决供氧限制问题提供了一条新的思路。本研究经人工设计，构建出一种适合于淡紫拟青霉高效表达的透明颤菌血红蛋白（VHb）基因——vgbpl基因。拟借助VHb的作用，使淡紫拟青霉的发酵性能得到改善，在供氧不足时可以获得更高的生长速率，以提高发酵的速度和产品效价。
从Genebank中查找透明颤菌血红蛋白（VHb）的氨基酸序列；根据密码子的简并性以及淡紫拟青霉的密码子偏好性原则，人工设计出vgbpl基因的核甘酸序列；根据重叠PCR的引物设计原则，将核甘酸序列分成6条寡聚核苷酸片段；经重叠PCR，将合成的寡聚核苷酸片段组装成vgbpl基因。经酶切、连接后，将vgbpl基因克隆至真核表达载体pPIC9K中，而构建成重组质粒pPIC9K/vgbpl。重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli )DH5α，采用菌落PCR法对重组子进行筛选，阳性重组子送上海英俊公司进行序列分析。序列分析和比对结果表明，我们获得了序列和阅读框正确的重组质粒pPIC9K/vgbpl。
总之，本研究根据透明颤菌血红蛋白（VHb）的氨基酸序列，人工设计出适合于淡紫拟青霉高效表达的vgbpl基因，通过重叠PCR成功构建出vgbpl基因，并构建了真核表达载体pPIC9K/vgbpl。这些工作为vgbpl基因转入淡紫拟青霉并实现VHb稳定而高效的表达奠定了重要基础。
关键词：淡紫拟青霉；透明颤菌血红蛋白；基因；人工设计；构建
参考文献
[1] Jatala P. Biological control of plant-parasific nematodes [J]. Ann Rev Phytopathol, 1986, 24:435~439.
[2] 陈淑鸿, 高学彪. 淡紫拟青霉MCWA18菌株对爪哇根结线虫卵孵化率的影响[J].中国生物防治,2000,16(2):78~80.
[3] Stirling G R. Biological Control of Plant Parasitic Nematodes Progress, Problems and Prospects. C. A. B International, 1991: 137～ 142
[4] Khan MR, Goswami BK. Evaluation of Paecilomyces lilacinus isolates against Meloidogyne incognita infecting tomato [J]. International Journal of Nematology, 2002, 12(1):111~114.
