plrv的ic-rt-pcr和das-elisa两种检测方法的比较.doc
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plrv的ic-rt-pcr和das-elisa两种检测方法的比较,plrv的ic-rt-pcr和das-elisa两种检测方法的比较本文共计15页，9353字；摘要 马铃薯卷叶病毒主要分布在寄主植物的韧皮部内，提纯过程复杂难以获得令人满意的产量，一般为0.4-1.3mg/kg组织叶片,限制了血清的大量制备;另一方面，也难以检测出存在于韧皮部的马铃薯卷叶病毒，因此，采用一种灵敏度高、操...
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PLRV的IC-RT-PCR和DAS-ELISA两种检测方法的比较
本文共计15页，9353字；
摘要
马铃薯卷叶病毒主要分布在寄主植物的韧皮部内，提纯过程复杂难以获得令人满意的产量，一般为0.4-1.3mg/kg组织叶片,限制了血清的大量制备;另一方面，也难以检测出存在于韧皮部的马铃薯卷叶病毒，因此，采用一种灵敏度高、操作简单的检测方法十分重要。
本次实验通过对DAS-ELISA、IC-RT-PCR、RT -PCR三种检测方法的灵敏度的比较发现：IC-PCR的灵敏度要比DAS-ELISA的灵敏度高出100倍以上，操作比起RT-PCR也简单得多。它省去提取核酸这一烦锁的步骤，而通过吸附在反应管壁上的抗血清来诱捕叶片组织中的病毒粒体来合成cDNA，再进行PCR反应。IC-PCR可大大减少操作过程中污染的机会，对标本有洁净作用，可大大降低无关核酸的污染和清除抑物，并且有捕捉和富集标本中病原体的作用，提高了PCR的特异性和敏感性，结果比较可靠。
DAS-ELISA的灵敏度和可信度主要受到抗血清的质量的影响，其次还受到所取样品的部位以及实验者操作的影响，因此容易出现假阳性和漏掉真阳性的情况。
关键词：马铃薯卷叶病毒,DAS-ELISA,IC-RT-PCR RT-PCR,检测,比较, 灵敏度
ABSTRACT
PLRV is the main cause that leads to the potato’s degeneration. Aphids transmit PLRV in a persistent manner. The procedure for viral purification is complex, furthermore, the yield is as low as 0.4-1.3mg per 1kg leaf tissue in most case. This limits the large-scale preparation of antiserum. On the other hand, serological method is difficult to detect the PLRV efficiently. In this experience, two reverse transcriptase polymerase reaction (RT-PCR) methods (direct RT-PCR, immuno-capture RT-PCR) were evaluated and compared with DAS-ELISA in order to develop a more sensitive assay for PLRV. By using IC-RT-PCR, the test can be performed in a single tube. Compared with existing ELISA assays. PLRV particles from a variety of isolates were trapped
目录：
1前言
1.1 马铃薯与马铃薯病毒
1.2 马铃薯病毒的诊断方法
1.3 马铃薯卷叶病毒及其为害
2材料和方法
2.1 材料
2.2方法
3结果与分析
3.1 DAS-ELISA的结果与分析
3.2 总核酸的提取
3.3 RT-PCR和IC-PCR的结果与要析
4结论和讨论
4.1 结论
4.2 讨论
部分参考文献
1.裘维蕃著.植物病毒学（修订版）.农业出版社.1984.
2.田波,裴美云编.植物病毒研究方法(上册).科学出版社.1987.
3.梁训生,张成良,张作芳编.植物病毒血清学技术.农业出版社.1985.
4.美.J.萨姆布鲁克,E.F弗里奇,T.曼尼阿苇斯著.金冬雁,黎孟枫等译.分子克隆实验指南(第二版).科学出版社.1996.
9.喻启桂,刘军连等.抗原捕获聚合酶链反应(AC-PCR)直接分型检测单纯疱病毒.病毒学报.1995,3,79-81.
10.张鹤龄.马铃薯卷叶病毒(PLRV)基因组研究进展.中国病毒学.1996,3,1-7.
本文共计15页，9353字；
摘要
马铃薯卷叶病毒主要分布在寄主植物的韧皮部内，提纯过程复杂难以获得令人满意的产量，一般为0.4-1.3mg/kg组织叶片,限制了血清的大量制备;另一方面，也难以检测出存在于韧皮部的马铃薯卷叶病毒，因此，采用一种灵敏度高、操作简单的检测方法十分重要。
本次实验通过对DAS-ELISA、IC-RT-PCR、RT -PCR三种检测方法的灵敏度的比较发现：IC-PCR的灵敏度要比DAS-ELISA的灵敏度高出100倍以上，操作比起RT-PCR也简单得多。它省去提取核酸这一烦锁的步骤，而通过吸附在反应管壁上的抗血清来诱捕叶片组织中的病毒粒体来合成cDNA，再进行PCR反应。IC-PCR可大大减少操作过程中污染的机会，对标本有洁净作用，可大大降低无关核酸的污染和清除抑物，并且有捕捉和富集标本中病原体的作用，提高了PCR的特异性和敏感性，结果比较可靠。
DAS-ELISA的灵敏度和可信度主要受到抗血清的质量的影响，其次还受到所取样品的部位以及实验者操作的影响，因此容易出现假阳性和漏掉真阳性的情况。
关键词：马铃薯卷叶病毒,DAS-ELISA,IC-RT-PCR RT-PCR,检测,比较, 灵敏度
ABSTRACT
PLRV is the main cause that leads to the potato’s degeneration. Aphids transmit PLRV in a persistent manner. The procedure for viral purification is complex, furthermore, the yield is as low as 0.4-1.3mg per 1kg leaf tissue in most case. This limits the large-scale preparation of antiserum. On the other hand, serological method is difficult to detect the PLRV efficiently. In this experience, two reverse transcriptase polymerase reaction (RT-PCR) methods (direct RT-PCR, immuno-capture RT-PCR) were evaluated and compared with DAS-ELISA in order to develop a more sensitive assay for PLRV. By using IC-RT-PCR, the test can be performed in a single tube. Compared with existing ELISA assays. PLRV particles from a variety of isolates were trapped
目录：
1前言
1.1 马铃薯与马铃薯病毒
1.2 马铃薯病毒的诊断方法
1.3 马铃薯卷叶病毒及其为害
2材料和方法
2.1 材料
2.2方法
3结果与分析
3.1 DAS-ELISA的结果与分析
3.2 总核酸的提取
3.3 RT-PCR和IC-PCR的结果与要析
4结论和讨论
4.1 结论
4.2 讨论
部分参考文献
1.裘维蕃著.植物病毒学（修订版）.农业出版社.1984.
2.田波,裴美云编.植物病毒研究方法(上册).科学出版社.1987.
3.梁训生,张成良,张作芳编.植物病毒血清学技术.农业出版社.1985.
4.美.J.萨姆布鲁克,E.F弗里奇,T.曼尼阿苇斯著.金冬雁,黎孟枫等译.分子克隆实验指南(第二版).科学出版社.1996.
9.喻启桂,刘军连等.抗原捕获聚合酶链反应(AC-PCR)直接分型检测单纯疱病毒.病毒学报.1995,3,79-81.
10.张鹤龄.马铃薯卷叶病毒(PLRV)基因组研究进展.中国病毒学.1996,3,1-7.
