f2选定群体混合样品大尺度定位的定量分析.doc
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f2选定群体混合样品大尺度定位的定量分析,f2选定群体混合样品大尺度定位的定量分析1.8万字 45页 原创作品，已通过查重系统 摘要图位克隆首先进行同线性测定及大尺度定位，然后通过3点测验确定突变基因所在染色体上的精确范围以克隆基因。同线性测定及大尺度定位一般选用一小的分离群体，用基因组若干分子标记进行连锁测验，根据测验结果确定所在的染色体。为减少工作量，常对...
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F2选定群体混合样品大尺度定位的定量分析
1.8万字 45页 原创作品，已通过查重系统
摘 要
图位克隆首先进行同线性测定及大尺度定位，然后通过3点测验确定突变基因所在染色体上的精确范围以克隆基因。同线性测定及大尺度定位一般选用一小的分离群体，用基因组若干分子标记进行连锁测验，根据测验结果确定所在的染色体。为减少工作量，常对分离群体的突变体的混合DNA样品与F1代DNA样品分子标记比较研究，初步判断连锁标记，然后进行小群体的分子标记单株检测进行连锁测验以确认突变体的连锁标记。
在F2偏分离混合DNA样品分子标记分析中，对应亲本扩增条带的相对含量代表着突变位点与该分子标记的重组率，而该重组率常常需要借助单株基因型分析、通过连锁测验获得。在混合DNA样品的分析中，亲本对应DNA条带扩增的强弱是群体基因型的代表，如果通过混合DNA样品的定量分析得到连锁测验的结果而避免单株基因型的检测，此将进一步极大地降低大尺度定位的强度。为实现这个目标要解决两个关键问题：（1） PCR产物即微量DNA的定量，（2） 基于混合样品对应亲本DNA条带相对扩增量计算交换率。
核酸定量有很多种方法，其中钼锑抗分光光度法定磷灵敏度高，所需仪器设备简单，其可靠性与灵敏度可与real-time PCR相当，通过系列实验先建立微量DNA检测体系，可以在200 μL 0 - 100 ng的 DNA含量的反应体系进行定量分析。但是，微克级DNA样品的消化处理十分困难，因此利用定磷法测定偏分离群体对应亲本扩增能力目前是不能实现的。
为了实现混合DNA样品的定量分析，我们又采用Scion Image 4.0.3.2图像处理软件对琼脂糖电泳照片中Col、Ler、F1及偏分离DNA样品的相应分子标记亲本扩增条带进行定量，进而计算了3个突变体26号突变体、AP1突变体、5号突变体与相应分子标记C19587、C19679、NGA6、A21912、A25576、D1175、D7970、D1175、D7970的连锁率分别是51%、0、0、10%、0、36%、32%。
关键词：图位克隆；核酸定量；拟南芥
1.8万字 45页 原创作品，已通过查重系统
摘 要
图位克隆首先进行同线性测定及大尺度定位，然后通过3点测验确定突变基因所在染色体上的精确范围以克隆基因。同线性测定及大尺度定位一般选用一小的分离群体，用基因组若干分子标记进行连锁测验，根据测验结果确定所在的染色体。为减少工作量，常对分离群体的突变体的混合DNA样品与F1代DNA样品分子标记比较研究，初步判断连锁标记，然后进行小群体的分子标记单株检测进行连锁测验以确认突变体的连锁标记。
在F2偏分离混合DNA样品分子标记分析中，对应亲本扩增条带的相对含量代表着突变位点与该分子标记的重组率，而该重组率常常需要借助单株基因型分析、通过连锁测验获得。在混合DNA样品的分析中，亲本对应DNA条带扩增的强弱是群体基因型的代表，如果通过混合DNA样品的定量分析得到连锁测验的结果而避免单株基因型的检测，此将进一步极大地降低大尺度定位的强度。为实现这个目标要解决两个关键问题：（1） PCR产物即微量DNA的定量，（2） 基于混合样品对应亲本DNA条带相对扩增量计算交换率。
核酸定量有很多种方法，其中钼锑抗分光光度法定磷灵敏度高，所需仪器设备简单，其可靠性与灵敏度可与real-time PCR相当，通过系列实验先建立微量DNA检测体系，可以在200 μL 0 - 100 ng的 DNA含量的反应体系进行定量分析。但是，微克级DNA样品的消化处理十分困难，因此利用定磷法测定偏分离群体对应亲本扩增能力目前是不能实现的。
为了实现混合DNA样品的定量分析，我们又采用Scion Image 4.0.3.2图像处理软件对琼脂糖电泳照片中Col、Ler、F1及偏分离DNA样品的相应分子标记亲本扩增条带进行定量，进而计算了3个突变体26号突变体、AP1突变体、5号突变体与相应分子标记C19587、C19679、NGA6、A21912、A25576、D1175、D7970、D1175、D7970的连锁率分别是51%、0、0、10%、0、36%、32%。
关键词：图位克隆；核酸定量；拟南芥
