thermus thermophilus木糖异构酶基因的克隆表达及酶学性质研究.doc
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thermus thermophilus木糖异构酶基因的克隆表达及酶学性质研究,thermus thermophilus木糖异构酶基因的克隆表达及酶学性质研究 1.67万字 40页 原创作品，已通过查重系统 摘要生物乙醇是一种环保的化石燃料替代能源。木质纤维素生物质是一种通过微生物发酵生产乙醇的重要资源之一。木质纤维素能够水解成单体己糖和戊糖，然而在半纤维素水解产物中最丰富的戊糖（高达40％）—木...
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Thermus thermophilus木糖异构酶基因的克隆表达及酶学性质研究
1.67万字 40页 原创作品，已通过查重系统
摘 要
生物乙醇是一种环保的化石燃料替代能源。木质纤维素生物质是一种通过微生物发酵生产乙醇的重要资源之一。木质纤维素能够水解成单体己糖和戊糖，然而在半纤维素水解产物中最丰富的戊糖（高达40％）—木糖仍未被充分利用。木糖可通过生物途径转化为乙醇，基于这个原因，木糖的乙醇发酵受到了广泛的关注。木糖异构酶是木糖发酵生物乙醇途径中的限速酶，本研究中，首先根据GenBank中的Thermus thermophilus菌木糖异构酶基因(xylA)序列特点，利用VectorNTI软件设计引物；提取出T. thermophilus菌的DNA，将其做为模板扩增得到大小约为1.2kbp的基因片段，测序显示其长度为1164bp。利用Blast软件进行测序结果的序列相似度比对，得知该片段与T. thermophilusHB8相应基因的相似性为100％。将PCR获得得木糖异构酶基因片段用限制性内切酶消化后连接于载体pSE380，将得到的连接产物导入感受态大肠杆菌，利用蓝白斑筛选选出呈白色的重组菌落。用IPTG诱导重组菌株，以含有空白pSE380质粒的大肠杆菌BL21做为对照，得到非常明显的42kDa特征蛋白条带表达产物。提取在大肠杆菌BL21中的表达产物，经Ni亲合层析与Sephacryl S-300凝胶过滤分离纯化处理，研究酶学性质，最终测得重组木糖异构酶的活性为19.6 U/mg，最适温度和pH分别为80℃、8.0，Km和Vmax 的值分别为15.9 mM、22.8U/mg。该文研究结果可为木糖生产乙醇提供一定参考。
关键词：木糖异构酶，克隆表达，Thermus thermophilus，酶学性质
1.67万字 40页 原创作品，已通过查重系统
摘 要
生物乙醇是一种环保的化石燃料替代能源。木质纤维素生物质是一种通过微生物发酵生产乙醇的重要资源之一。木质纤维素能够水解成单体己糖和戊糖，然而在半纤维素水解产物中最丰富的戊糖（高达40％）—木糖仍未被充分利用。木糖可通过生物途径转化为乙醇，基于这个原因，木糖的乙醇发酵受到了广泛的关注。木糖异构酶是木糖发酵生物乙醇途径中的限速酶，本研究中，首先根据GenBank中的Thermus thermophilus菌木糖异构酶基因(xylA)序列特点，利用VectorNTI软件设计引物；提取出T. thermophilus菌的DNA，将其做为模板扩增得到大小约为1.2kbp的基因片段，测序显示其长度为1164bp。利用Blast软件进行测序结果的序列相似度比对，得知该片段与T. thermophilusHB8相应基因的相似性为100％。将PCR获得得木糖异构酶基因片段用限制性内切酶消化后连接于载体pSE380，将得到的连接产物导入感受态大肠杆菌，利用蓝白斑筛选选出呈白色的重组菌落。用IPTG诱导重组菌株，以含有空白pSE380质粒的大肠杆菌BL21做为对照，得到非常明显的42kDa特征蛋白条带表达产物。提取在大肠杆菌BL21中的表达产物，经Ni亲合层析与Sephacryl S-300凝胶过滤分离纯化处理，研究酶学性质，最终测得重组木糖异构酶的活性为19.6 U/mg，最适温度和pH分别为80℃、8.0，Km和Vmax 的值分别为15.9 mM、22.8U/mg。该文研究结果可为木糖生产乙醇提供一定参考。
关键词：木糖异构酶，克隆表达，Thermus thermophilus，酶学性质
