鸡传染性法氏囊病毒多抗原表位序列表达载体的构建及原核表达.doc
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鸡传染性法氏囊病毒多抗原表位序列表达载体的构建及原核表达,1.6万字35页原创作品，已通过查重系统 摘 要鸡传染性法氏囊病是一种由鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease viruses，ibdv）引起的急性、接触性禽类传染病。ibdv基因组主要编码vp1、vp2、vp3、vp4和vp5共...
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鸡传染性法氏囊病毒多抗原表位序列表达载体的构建及原核表达
1.6万字 35页 原创作品，已通过查重系统
摘 要
鸡传染性法氏囊病是一种由鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Viruses，IBDV）引起的急性、接触性禽类传染病。IBDV基因组主要编码VP1、VP2、VP3、VP4和VP5共5种多聚蛋白，其中VP2蛋白具有血清型特异性，包含了大部分负责诱导中和抗体的抗原决定簇，是IBDV主要的保护性抗原。
为了研制一种新的鸡法氏囊病重组疫苗的抗原，本实验选取了VP2蛋白编码基因上的三个抗原决定簇，设计了可以合成这三个抗原决定簇串联序列(鸡法氏囊病毒多抗原表位串联肽核酸序列)的四条引物，利用SOE-PCR方法克隆得到鸡法氏囊病毒多抗原表位串联肽核酸序列。通过EcoR I和Sal I两个酶切位点使该核酸序列插入原核表达载体(pET32a)。SDS-PAGE 实验结果表明鸡法氏囊病毒重组多抗原表位序列可以在大肠杆菌中得到表达，表达量为19%。
另外，我们还对IBDV多抗原表位序列在大肠杆菌中的表达条件进行了优化。确定了在不同IPTG的诱导浓度（0.5 mM，1 mM，1.5 mM，2mM，2.5 mM），不同菌体接种比例（0.5%，1%，1.5%，2%，2.5%），不同诱导时间（1h，2h，3h，4h，5h，6h），不同诱导转速条件下（160rpm，180rpm，200rpm，220rpm)，IBDV 多抗原表位序列表达量的变化。
最终，本研究成功的构建了IBDV多抗原表位序列的原核表达载体，并确定了最优表达条件。
关键词：鸡法氏囊病毒（IBDV）；多抗原表位序列；载体；表达；优化
1.6万字 35页 原创作品，已通过查重系统
摘 要
鸡传染性法氏囊病是一种由鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Viruses，IBDV）引起的急性、接触性禽类传染病。IBDV基因组主要编码VP1、VP2、VP3、VP4和VP5共5种多聚蛋白，其中VP2蛋白具有血清型特异性，包含了大部分负责诱导中和抗体的抗原决定簇，是IBDV主要的保护性抗原。
为了研制一种新的鸡法氏囊病重组疫苗的抗原，本实验选取了VP2蛋白编码基因上的三个抗原决定簇，设计了可以合成这三个抗原决定簇串联序列(鸡法氏囊病毒多抗原表位串联肽核酸序列)的四条引物，利用SOE-PCR方法克隆得到鸡法氏囊病毒多抗原表位串联肽核酸序列。通过EcoR I和Sal I两个酶切位点使该核酸序列插入原核表达载体(pET32a)。SDS-PAGE 实验结果表明鸡法氏囊病毒重组多抗原表位序列可以在大肠杆菌中得到表达，表达量为19%。
另外，我们还对IBDV多抗原表位序列在大肠杆菌中的表达条件进行了优化。确定了在不同IPTG的诱导浓度（0.5 mM，1 mM，1.5 mM，2mM，2.5 mM），不同菌体接种比例（0.5%，1%，1.5%，2%，2.5%），不同诱导时间（1h，2h，3h，4h，5h，6h），不同诱导转速条件下（160rpm，180rpm，200rpm，220rpm)，IBDV 多抗原表位序列表达量的变化。
最终，本研究成功的构建了IBDV多抗原表位序列的原核表达载体，并确定了最优表达条件。
关键词：鸡法氏囊病毒（IBDV）；多抗原表位序列；载体；表达；优化
