植物表达载体的改造.doc

植物表达载体的改造

1.38万字 35页 原创作品，已通过查重系统

摘 要
植物表达载体在植物功能基因研究及植物转基因育种方面发挥着重要作用。改造载体上的多克隆位点，构建亚细胞定位载体和瞬间表达载体，对植物基因的克隆及研究具有重要意义。
本研究利用PCR技术从大肠杆菌BL21基因组DNA中扩增LacZ’基因，进而以LacZ’基因作为选择性标记，经过两次重组操作并结合蓝白斑筛选，在植物表达载体pBI220上引入合适的酶切位点，获得重组质粒pBI220-MCS1，并进行测序验证，其新的酶切位点为BamHI-SmaI-SalI-SpeI-SacI。
本研究以含EGFP基因的pEGFP-N1为模板， PCR扩增EGFP基因，经SalI和SacI双酶切，连入pBI200-MCS1，得到可用于亚细胞定位的重组质粒pBI200-EGFP。
本研究还利用PCR技术从pBI121载体上扩增了GUS基因表达盒，采用PstI和EcoRI双酶切后，连入pUC18，得到重组质粒pUC18-GUS。又以pBI200-MCS2为模板，PCR扩增了该载体上含多克隆位点MCS2的表达盒，经PstI和HindIII双酶切后，连入pUC18-GUS，形成植物表达载体pGUS，该载体以GUS基因为报告基因，可用于植物功能基因的瞬间表达研究。
本论文改造和构建了三个植物表达载体：pBI220-MCS1、pBI200-EGFP和pGUS，为植物功能基因的克隆与表达提供了便利。


关键词：植物表达载体；多克隆位点；EGFP基因；GUS基因