芋螺毒素mⅦa在家蚕中的表达.doc
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芋螺毒素mⅦa在家蚕中的表达,芋螺毒素mⅦa在家蚕中的表达 1.42万字33页原创作品，已通过查重系统摘要芋螺毒素ω-mⅦa能特异地阻断钙离子通道，阻止疼痛信号的传导，以其为有效成分的ziconotide已被fda批准用于治疗慢性疼痛。ω-mⅦa的合成目前主要采用的是固相合成法，但该方法产率低，合成成本高，不能完全满足作为药物商业化生产的要求。家蚕...
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此文档由会员 马甲线女神 发布
芋螺毒素MⅦA在家蚕中的表达
1.42万字 33页 原创作品，已通过查重系统
摘 要
芋螺毒素ω-MⅦA能特异地阻断钙离子通道，阻止疼痛信号的传导，以其为有效成分的Ziconotide已被FDA批准用于治疗慢性疼痛。ω-MⅦA的合成目前主要采用的是固相合成法，但该方法产率低，合成成本高，不能完全满足作为药物商业化生产的要求。家蚕杆状病毒表达系统是以家蚕核型多角体病毒（BmNPV）为载体，家蚕为宿主的昆虫杆状病毒表达载体系统，重组蛋白的表达水平高，经修饰后生物学功能比较完整，能够用作开发生物反应器，成本低廉，易于产业化。
本文利用PCR技术从pUC18-MⅦA上克隆经密码子优化的ω-MⅦA基因，用BamHⅠ和HindⅢ双酶切后，连入供体质粒pDUAL-EGFP，得到重组供体质粒pDUAL-EGFP-MⅦA。经测序验证后，采用转座法构建了含有芋螺毒素MⅦA基因的重组BmNPV。经多轮扩增后获得了滴度为1.6×107pfu/mL的BV粒子。使用200 pfu的BV粒子注射五龄初家蚕，感染5天后，家蚕体表可观察到绿色荧光。收集体表具绿色荧光的家蚕血液，通过醋酸扭体实验发现，注射家蚕血液的小鼠无扭体现象，而对照组小鼠具有明显的扭体现象，说明重组芋螺毒素ω-MⅦA具有镇痛活性。本研究利用家蚕杆状病毒表达系统成功表达了具镇痛活性的重组ω-MⅦA，为芋螺毒素的生物合成提供了新的思路和方法。
关键词：芋螺毒素，ω-MⅦA；杆状病毒；家蚕；镇痛活性
1.42万字 33页 原创作品，已通过查重系统
摘 要
芋螺毒素ω-MⅦA能特异地阻断钙离子通道，阻止疼痛信号的传导，以其为有效成分的Ziconotide已被FDA批准用于治疗慢性疼痛。ω-MⅦA的合成目前主要采用的是固相合成法，但该方法产率低，合成成本高，不能完全满足作为药物商业化生产的要求。家蚕杆状病毒表达系统是以家蚕核型多角体病毒（BmNPV）为载体，家蚕为宿主的昆虫杆状病毒表达载体系统，重组蛋白的表达水平高，经修饰后生物学功能比较完整，能够用作开发生物反应器，成本低廉，易于产业化。
本文利用PCR技术从pUC18-MⅦA上克隆经密码子优化的ω-MⅦA基因，用BamHⅠ和HindⅢ双酶切后，连入供体质粒pDUAL-EGFP，得到重组供体质粒pDUAL-EGFP-MⅦA。经测序验证后，采用转座法构建了含有芋螺毒素MⅦA基因的重组BmNPV。经多轮扩增后获得了滴度为1.6×107pfu/mL的BV粒子。使用200 pfu的BV粒子注射五龄初家蚕，感染5天后，家蚕体表可观察到绿色荧光。收集体表具绿色荧光的家蚕血液，通过醋酸扭体实验发现，注射家蚕血液的小鼠无扭体现象，而对照组小鼠具有明显的扭体现象，说明重组芋螺毒素ω-MⅦA具有镇痛活性。本研究利用家蚕杆状病毒表达系统成功表达了具镇痛活性的重组ω-MⅦA，为芋螺毒素的生物合成提供了新的思路和方法。
关键词：芋螺毒素，ω-MⅦA；杆状病毒；家蚕；镇痛活性
