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芋螺毒素mviia在大肠杆菌中的表达与纯化,芋螺毒素mviia在大肠杆菌中的表达与纯化1.3万字30页 原创作品，已通过查重系统摘要芋螺毒素是海洋动物芋螺的毒液管和毒腺所分泌的一类具特异生物活性的小肽神经毒素。其中ω-mviia是一种有效并且特异性很高的神经元n-型电压敏感性钙通道阻滞剂，具有镇痛和神经保护作用。由于ω-mviia在药理学、神经生物学研究等方面具...
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芋螺毒素MVIIA在大肠杆菌中的表达与纯化
1.3万字 30页 原创作品，已通过查重系统
摘 要
芋螺毒素是海洋动物芋螺的毒液管和毒腺所分泌的一类具特异生物活性的小肽神经毒素。其中ω-MVIIA是一种有效并且特异性很高的神经元N-型电压敏感性钙通道阻滞剂，具有镇痛和神经保护作用。由于ω-MVIIA在药理学、神经生物学研究等方面具有非常重要的意义，近年来对芋螺毒素的需求大幅度增加，而直接从芋螺中提取芋螺毒素远远满足不了现实需求。因此，本研究拟利用基因工程方法在大肠杆菌中高效表达具有生物学活性的芋螺毒素-MVIIA。
本文利用PCR技术从pUC18-MVIIA上扩增经密码子优化的MVIIA基因，用BamHI、HindIII双酶切后连入原核表达载体pET32a，得到重组质粒pET32-MVIIA，测序表明重组质粒上的MVIIA基因序列完全正确。将重组质粒pET32-MVIIA转入大肠杆菌Origami B菌株，经IPTG诱导后，采用SDS-PAGE技术可检测到重组MVIIA的表达（约24kDa）。进而利用溶菌酶结合超声波破碎细胞，使用镍离子亲和树脂从细胞破碎液分离重组MVIIA，经透析、冷冻干燥后，溶解于生理盐水。采用BCA法对重组MVIIA进行定量，其浓度为0.38 mg/mL。按5 mg/Kg剂量，在小鼠腹腔中注射纯化的重组MVIIA，进行醋酸扭体试验，与注射生理盐水的对照组相比，注射重组MVIIA的小鼠无任何扭体现象，这表明重组芋螺毒素具有镇痛活性。本研究为利用大肠杆菌表达系统生产芋螺毒素提供了依据。
关键词：芋螺毒素MVIIA；大肠杆菌；基因工程；镇痛活性
1.3万字 30页 原创作品，已通过查重系统
摘 要
芋螺毒素是海洋动物芋螺的毒液管和毒腺所分泌的一类具特异生物活性的小肽神经毒素。其中ω-MVIIA是一种有效并且特异性很高的神经元N-型电压敏感性钙通道阻滞剂，具有镇痛和神经保护作用。由于ω-MVIIA在药理学、神经生物学研究等方面具有非常重要的意义，近年来对芋螺毒素的需求大幅度增加，而直接从芋螺中提取芋螺毒素远远满足不了现实需求。因此，本研究拟利用基因工程方法在大肠杆菌中高效表达具有生物学活性的芋螺毒素-MVIIA。
本文利用PCR技术从pUC18-MVIIA上扩增经密码子优化的MVIIA基因，用BamHI、HindIII双酶切后连入原核表达载体pET32a，得到重组质粒pET32-MVIIA，测序表明重组质粒上的MVIIA基因序列完全正确。将重组质粒pET32-MVIIA转入大肠杆菌Origami B菌株，经IPTG诱导后，采用SDS-PAGE技术可检测到重组MVIIA的表达（约24kDa）。进而利用溶菌酶结合超声波破碎细胞，使用镍离子亲和树脂从细胞破碎液分离重组MVIIA，经透析、冷冻干燥后，溶解于生理盐水。采用BCA法对重组MVIIA进行定量，其浓度为0.38 mg/mL。按5 mg/Kg剂量，在小鼠腹腔中注射纯化的重组MVIIA，进行醋酸扭体试验，与注射生理盐水的对照组相比，注射重组MVIIA的小鼠无任何扭体现象，这表明重组芋螺毒素具有镇痛活性。本研究为利用大肠杆菌表达系统生产芋螺毒素提供了依据。
关键词：芋螺毒素MVIIA；大肠杆菌；基因工程；镇痛活性
